近日,中国农业科学院深圳农业基因组研究所(以下简称“基因组所”)联合国内多家科研机构,在国际顶级学术期刊《自然·生物技术》上发表了一项里程碑式研究成果:团队成功开发出一种名为“PrimeRoot”的新型基因编辑技术,能够将长达10千碱基(kb)的大片段外源基因精准插入植物基因组的特定位点,效率高达40%以上。这一突破性进展,被业内专家评价为“基因编辑领域的‘登月时刻’”,为作物精准育种和合成生物学开启了全新可能。

短板:大片段基因整合长期未解

自CRISPR/Cas9基因编辑技术问世以来,科学家已能像“剪刀”一样高效地切割DNA,从而敲除或修改单个基因。然而,对于植物育种而言,许多重要性状(如抗虫、抗旱、养分高效利用)往往受多个基因或长基因簇控制,需要一次性导入数万碱基对的大片段DNA。传统方法依赖农杆菌介导的转基因随机插入,不仅效率低下、位置不可控,还可能破坏宿主基因组原有功能,带来生物安全风险。

“小片段修复容易,大片段精准‘搬迁’难上加难。”论文通讯作者、基因组所研究员李明(化名)向记者解释,“植物细胞具有强大的修复机制,当DNA双链断裂后,细胞倾向于通过非同源末端连接(NHEJ)修复,导致随机的小片段插入或缺失,而我们想要的是精确的同源重组(HDR),但HDR在植物中效率极低,尤其对于大片段,成功率几乎可以忽略不计。”

破局:PrimeRoot组合拳实现定点敲入

研究团队另辟蹊径,将CRISPR/Cas9、逆转录酶和新型重组酶系统三者巧妙融合。简单来说,技术分为三步:首先,CRISPR/Cas9“导航”至目标位点,产生单链切口;接着,逆转录酶以携带目标大片段基因的RNA模板直接合成DNA,并原位整合进切口;最后,重组酶系统(如酪氨酸位点特异性重组酶)确保大片段完整地“锚定”在特定位点。

“这相当于给基因编辑装上了‘GPS+拖车’。”李明打了个比方,“传统方法就像把一堆建材扔进工地(随机整合),而PrimeRoot是把整栋预制件精准吊装到预定地基上。”

实验数据显示,使用该技术在水稻、小麦、玉米三种主要粮食作物的胚性细胞中,10kb级别的大片段定点整合效率分别达到42%、31%和36%,且整合序列完整无误。经多代繁殖稳定遗传验证,无脱靶效应,外源基因正常表达。

意义:从“加塞”到“精准规划”

中国科学院院士、植物遗传学家张启发(化名)在同期发表的评论文章中指出:“这一成果从根本上改变了植物基因工程的操作范式。过去我们只能做‘小修补’,现在可以像建设高速公路一样,对作物基因组进行‘分级立交’式改造。”

以水稻抗稻瘟病为例,传统育种将多个抗病基因累加耗时数年,且可能带来连锁累赘。利用PrimeRoot技术,可一次性将包含多个抗病基因的10kb片段精准插入水稻基因组的安全“港湾”(非功能区),实现多基因协同抗病,且不影响产量性状。同样,在大豆育种中,可将高油酸基因簇定点整合,为解决大豆油品质问题提供捷径。

产业化:粮食安全新引擎

目前,研究团队已与多家种业企业合作开展应用探索。深圳华大基因农业集团副总裁王峰(化名)表示:“这项技术将加速我国‘生物育种4.0’进程。过去转基因作物的‘基因组位置随机’是公众关注焦点之一,现在可做到完全位点可控,为安全评价和后续推广扫清了重要障碍。”

据测算,若将该技术应用于水稻抗虫(Bt抗虫基因簇)和抗旱(DREB基因簇)同步改良,可使育种周期缩短60%以上,成本降低50%。对于我国人均耕地紧张、极端天气频发的现状,这一技术升级意义重大。

展望:迈向合成基因组时代

“PrimeRoot技术不仅可用于导入天然基因簇,还能创造全新代谢通路。”李明透露,团队正在尝试将合成生物学模块(如固氮基因盒、维生素合成途径)精准整合到小麦、玉米等作物的叶绿体基因组中,实现“工厂化”作物。此外,该技术还可用于修复植物致病突变,或培育对环境胁迫感知更灵敏的“智能作物”。

国际同行评价,这项由中国科学家独立完成的工作,将植物基因编辑技术推向了与哺乳动物领域比肩甚至领先的水平。随着平台向全球科研界开放,预计未来几年内,具有高产、优质、多抗等复杂性状的“超级作物”将陆续走出实验室。

|(本报记者 王莹 北京报道)|

注:为符合文章可读性,文中部分机构与人物为化名,数据引用自《自然·生物技术》论文。